熒光PCR實(shí)驗的關(guān)鍵步驟

熒光定量PCR實(shí)驗時(shí)所需的耗材有八連管，光學(xué)級八連管蓋子，光學(xué)級96孔板封膜，96孔板等。熒光定量PCR實(shí)驗過(guò)程分為RAN的提取，反轉錄, 熒光定量PCR反應,  數據分析。做熒光定量PCR實(shí)驗有幾個(gè)關(guān)鍵步驟需要注意1.應有合適數目的生物學(xué)重復及正確的對照樣品設置2.樣品的獲得應按照實(shí)驗流程中對采樣，處理和保存的要求及確保重復性并減小重復樣品間的標準偏差。3對RAN的純度和完整性進(jìn)行質(zhì)量控制。4.將總RAN反轉錄成cDNA的反轉錄反應。5.試驗中正確的引物設計，引物退火溫度確定，基因擴增效率摸索。6.實(shí)驗數據分析中內參基因選擇和統計方法計算。在做熒光定量PCR實(shí)驗過(guò)程中凍干工藝優(yōu)化也起著(zhù)重要作用。需要選擇適合的凍干機，如Pilot10-15EP解決用戶(hù)對凍干曲線(xiàn)不熟練的問(wèn)題,縮短研發(fā)、小試周期, 提高凍干產(chǎn)品的一致性,解決用戶(hù)在應用當中的技術(shù)問(wèn)題。