實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法有實(shí)時(shí)熒光PCR一步法與實(shí)時(shí)熒光PCR兩步法。一步法與兩步法有什么區別呢？一步法為反轉錄和PCR擴增在同一個(gè)管內完成。兩步法為反轉錄和PCR擴增分兩步進(jìn)行，先從RAN模板反轉錄得到cDNA，得到的cDNA在進(jìn)行一次或多次不同的PCR反應。一步法與兩步法有那些優(yōu)點(diǎn)呢？一步法: 快速, 簡(jiǎn)便, 敏感, 減少污染機會(huì ), 減少了RNA 二級結構, 聚合酶具有校正活性, 減少PCR 反應的錯配率。兩步法: 同一管中同時(shí)擴增兩個(gè)引物, 減少了一些人為的誤差; 將RNA 轉錄為cDNA, 易于保存，把反轉錄體系分開(kāi)做，一次的轉錄產(chǎn)物可以多次用來(lái)做PCR，非常適用于摸索PCR條件。;兩步法整個(gè)過(guò)程比一步法的費用少。一步法和兩步法各有其特點(diǎn)，要按照試驗的對象具體確定用那一種方法，對不適合于提取mRNA的樣品只能用一步法RT-PCR方法。熒光PCR凍干設備技術(shù)要點(diǎn)：1.無(wú)外界干擾熱量。2.內部溫度均一。3.極限真空度好。4.設備過(guò)程控制能力強。試劑凍干機Pilot5-8T涉及產(chǎn)品有熒光PCR、免疫微球、化學(xué)發(fā)光、基因芯片、量子點(diǎn)、ELISA、膠體金、POCT、IVD校準品質(zhì)控品校準品、內毒素檢測試劑、血清、白蛋白、干細胞及相應提取物等。