熒光PCR凍干-DTT

二硫蘇糖醇（簡(jiǎn)稱(chēng)為DTT）是一種小分子有機還原劑，其還原狀態(tài)下為線(xiàn)性分子。DTT有什么特點(diǎn)？怎么保存呢？DTT是一種常用還原劑，有抗氧化作用，進(jìn)口分裝。DTT和巰基乙醇相比， DTT的刺激性氣味要小很多，毒性也比巰基乙醇低很多。另外DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時(shí)，兩者效果相近。DTT一般保存條件為-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。由于容易被空氣氧化， DTT的穩定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長(cháng)它的使用壽命。DTT作為PCR的添加劑與DMSO、甜菜堿、BSA混合配制成的復合型添加劑，按照一定比例配比，能獲得PCR擴增特異性和很高的PCR擴增產(chǎn)量。PCR的擴增反應并不是可以無(wú)窮地進(jìn)行下去的，經(jīng)過(guò)一定的循環(huán)周期后需擴增的片段不再按指數增多而逐漸進(jìn)入平坡；進(jìn)入平坡的循環(huán)次數，取決于起始時(shí)存在的模板拷貝數以及合成的DNA總量。所謂平坡就是批PCR循環(huán)的后期，合成產(chǎn)物達0.3～1pmol時(shí)，由于產(chǎn)物的堆積，使原來(lái)以指數增加的速率變成平坦的曲線(xiàn)。

試劑凍干機Pilot3-6T應用示例（熒光PCR凍干）：

1. 探針、底物、引物原料要求確定。
2. 凍干溶液配方開(kāi)發(fā)，采用正交法或響應曲面法進(jìn)行輔料篩選。
3. 選擇適合的包材和模具。
4. 設計凍干曲線(xiàn)配合輔料篩選。
5. 確定配方及工藝。
6. 穩定性測試。
7. 根據穩定性測試結果修正工藝或配方。
8. 整個(gè)環(huán)節注意環(huán)境、設備、人員的結合。